產(chǎn)品名稱：Elabscience小鼠胰島素ELISA試劑盒(E-EL-M1382)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào)：E-EL-M1382

品牌：Elabscience

產(chǎn)品規(guī)格：96T;48T;96T*5

儲(chǔ)存條件：試劑盒在 2-8℃可保存 3 個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.分別設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)孔加入 100 μL倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品， 空白孔加入 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液，其余孔加入 100 μL 待測(cè)樣本(建 議所有的待檢樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在檢測(cè)中設(shè)立復(fù)孔；建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)或咨詢技 術(shù)支持確定待檢樣本的稀釋倍數(shù))。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育 90 分鐘。提 示：加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，避免 產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制在 10 分鐘內(nèi)。

2.甩盡孔內(nèi)液體，不用洗滌。每個(gè)孔中加入生物素化抗體工作液 100 μL，酶 標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 1 小時(shí)。

3.甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液 350 μL，浸泡 1 分 鐘，吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，拍干。重復(fù)此洗板步驟 3 次。提示：此 處與其他洗板步驟都可使用洗板機(jī)(參考北京拓普 DEM-3 型洗板機(jī)參數(shù)設(shè) 置：2 點(diǎn)吸，每孔加入洗滌液 350 μL，振板 5 秒，吸液 0.5 秒)。洗板完成 后請(qǐng)立即進(jìn)行下步操作，不要讓微孔板干燥。

4.每孔加 HRP 酶結(jié)合物工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 30 分鐘。

5.甩盡孔內(nèi)液體，洗板 5 次，方法同步驟 3。

6.每孔加底物溶液(TMB)90 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分鐘左 右。提示：根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo) 準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)(前 4 個(gè)顯色孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度)，即可終止。提前 15 分鐘打開酶標(biāo)儀預(yù)熱。

7.每孔加終止液 50 μL，終止反應(yīng)。提示：終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶 液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD 值)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1. 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以 濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)軸上擬合四參數(shù)邏輯函數(shù)的 標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘 以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

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